Медицина будущего

Науки о жизни

Клеточные технологии

Рыболовство и рыбоводство

Клеточная инженерия. Прикладная генетическая инженерия. Инженерная энзимология

эндометриоз

Куликова Наталья Владимировна

20.12.1994

-

236041

Калининград, Невского 14

Алтайский край

КАЛИНИНГРАД

8(911) 720-5044

-

dockulikova@rambler.ru

-

-

БФУ им. И. Канта

медицинское дело

БФУ им. И. Канта

Аспирант

участие в седьмой научной конференции "студенческая весна"

-

Разработка инновационного способа диагностики риска развития генитального эндометриоза методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.

Разработка инновационного способа диагностики риска развития генитального эндометриоза методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.

На данный момент действующих ПЦР тест-систем для ранней диагностики генитального эндометриоза по генам-маркерам VEGF и MUC-2 не обнаружено. Близким аналогом является тест-система от компании 23andMe, оценивающая предрасположенность к ряду наследственных заболеваний, в том числе, эндометриозу, основанная на полногеномном анализе. Данная разработка отличается низкой специфичностью и высокой стоимостью в 14900 рублей. Стоимость предлагаемой разработки будет составлять около 400000 рублей. Себестоимость одного ПЦР-анализа составит 2500 рублей. Преимущества данной разработки заключаются в повышенной эффективности ПЦР на 15% и специфичности на 10%, а также использовании наиболее точных и уникальных генетических маркеров для ПЦР-теста. Принципиальная инновационность предложенного способа будет заключаться в разработке способа определения риска развития генитального эндометриоза у женщин репродуктивного возраста при помощи ПЦР тест-системы с использованием генетических маркеров в генах VEGF и MUC-2. Поскольку в медицине существует проблема, связанная с несвоевременным началом лечения заболевания из-за сложности диагностики эндометриоза, использование разрабатываемой тест-системы позволит выявлять риск развития генитального эндометриоза уже за долго до его клинических проявлений и осуществлять профилактические меры или лечение с использованием наиболее оптимальных методик и подходов. Наиболее близким по назначению является способ диагностики гиперпластических процессов эндометрия у больных миомой матки, заключающийся в определении показателей каталазы, каталазного числа, малонового диальдегида в супернатанте смыва из полости матки или менструальной крови одномоментно (RU №2007101040, публ. 09.01.2007). Схожим является способ диагностики гиперпластических процессов эндометрия, включающий количественное определение содержания лизосомального фермента b-D-глюкуронидазы (RU №2159441, публ. 20.11.2000). Известен способ ранней диагностики доброкачественных гиперпластических процессов эндометрия, включающий забор венозной крови, анализ ее на содержание продуктов перекисного окисления липидов (RU №2190221, публ. 27.09.2002). Недостатком известных способов является то, что они решают задачу диагностики гиперпластических процессов эндометрия, а не прогнозирования риска развития генитального эндометриоза. Принципиально похожим на данную разработку является способ, описанный в иностранной патентной базы («The kras-variant and endometriosis», патент WO 2012112883 A1), предложенный учеными из Йельского университета, позволяющий задолго до начала клинических проявлений эндометриоза оценивать риск его развития, однако применимость данного метода к российской популяции имеет ограничения, так как описанные в способе генетические маркеры могут не быть ассоциированы с генитальным эндометриозом в российской популяции ввиду этнических различий. Потребителями разработанной ПЦР тест-системы будут женщины репродуктивного возраста, направленные врачом-гинекологом желающие предотвратить индивидуальный риск развития генитального эндометриоза. Также потребителями будут женщины с бесплодием, обратившиеся в клиники, которым будут назначать данный тест для дополнительного подтверждения диагноза эндометриоза и оптимизации терапевтических стратегий.

Применения данного способа не будет заменять проведение дополнительных диагностических, уже известных, анализов для подтверждения диагноза генитального эндометриоза, в случае положительного ПЦР-теста, в связи с многофакторной этимологией заболевания. Панель однонуклеотидных полиморфизмов в генах VEGF и MUC-2 для ранней диагностики эндометриоза будет разработана в результате клинико-биологического обследования пациентов при профилактических осмотрах. В основе способа будет лежать применение уникального набора генетических маркеров для детекции SNP-полиморфизмов методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Методология способа будет заключаться в следующем: Применения способа может быть осуществлено в лабораторных условия врачом-лаборантом в клинико-диагностическом центре или специализированных клиниках. Способ заключается в экстракции ДНК из любой биологической жидкости с последующим проведением ПЦР в режиме реального времени. Все реагенты для ПЦР хранятся при температуре -20С, тогда как для выделения ДНК преимущественно при +4С. В частности, геномную ДНК будет выделятся из цельной крови пациента при помощи набора «ДНК-Экстран-1», согласно протоколу производителя (ЗАО «Синтол»), либо другим известным методом. Генотипирование будет проводиться методом ПЦР в режиме реального времени с использованием праймеров, фланкирующих полиморфизм, и конкурирующих TaqMan-зондов. На 3′-конце зонда находится флуоресцентная метка – флуорофор (FAM, HEX), а на 5′-конце «гаситель» флуоресценции (RTQ1; BHQ-1). При близком расположении «гасителя» и флуорофора энергия, которая поглощена флуорофором, по принципу флуоресцентно-резонансного переноса переходит на «гаситель». Вследствие этого сигнал флуоресценции отсутствует. В процессе ПЦР при повышении температуры до 95°С происходит плавление ДНК и праймерами с зондами, отжигаются на комплементарном участке ДНК при 63°С. В процессе амплификации ДНК-полимераза расщепляет зонд, при этом, расстояние между «гасителем» и флуорофором увеличивается, как и флуоресценция. В этот момент можно зарегистрировать флуоресцентный сигнал от флюорофора. Детекция результатов осуществляется в блоке амплификатора LightCycler 480 Instrument II ("Roche", Швейцария) в котором будут проводить считывание результатов ПЦР. Протокол ПЦР стандартный и будет состоять из следующих этапов: нагрев реакционной смеси при 95°С – 3 мин и амплификация в течение 40 циклов в следующем режиме: 95°С – 15 сек, 63°С – 40 сек.

-

-

-

-

-

-

-

Медицина, гинекология, генетическая диагностика, ДНК-диагностика.

Аналогов продукта не имеется

Формирование исследуемых групп пациенток с диагнозом генитальный эндометриоз и здоровых добровольцев. Сбор анамнеза больных, его систематизация. Сбор и биологического материала - периферической венозной крови. Выделения геномной ДНК из клеток крови. Постановка ПЦР в режиме реального времени для определения полиморфизмов rs10902088 rs10794288 гена MUC-2. Поиск ассоциаций полиморфизмов rs10902088 rs10794288 с риском развития генитального эндометриоза у обследованных пациенток.

-

-

-

-

Нет

-

-

-

-

Нет

НИР/Лабораторные испытания

Да ,Программа УМНИК Фонда содействия Инновациям

-

Да

-

-

Нет

Нет

Да

Да

Да

Да

Да

Да